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恩拉霉素工艺与摇瓶柜

发布时间:2011-02-15 浏览次数:376

 将链霉菌 Streptomyces sp .NJwGY3665 菌种接到葡萄糖0.5%,牛肉膏 0.5 %,蛋白胨 0.5%,NaCl0.5%,琼脂

  1.5%、水 96.5%,pH6.0的葡萄糖营养培养基中,进行斜面培养,在28℃下培养 2天。取斜面菌种,加入2~3ml无菌水(每18×180mm的试管斜面菌种),用接种环轻轻将菌苔洗下,制成孢子悬液,取 0.5ml孢子悬液接种到含 40ml葡萄糖 1.0%,玉米浆 3%,CaCO31%、酵母膏 0.5%、 NaCl0.1%、水 94.4%,pH7.0的液体种子培养基中培养 3天,培养温度为 28℃,转速为 200rpm。再将 5ml种子液接入到装液量为100ml含有葡萄糖 4.0%,淀粉 2.0%,玉米浆 2.0%、酵母膏 0.1%、黄豆饼粉 2%、NaCl0.5%、CaCO31.5%、 NH4Cl0.5%、磷酸二氢钾 0.2%、硫酸铵 0.3%、水 86.9%的发酵培养集中,在28℃,180rpm,pH6.0的条件下摇床发酵培养 5天,获得含有恩拉霉素的菌丝体,将 1g发酵后的菌丝体,用去离子水清洗,悬浮在 30mL乙醇中,乙醇的体积分数为 70%,pH为 4.5,用 KQ-100型超声机进行微生物细胞破碎 15min,得到含有恩拉霉素的混合物,将破碎后的混合物用 HYG-Ⅱa型摇瓶柜振荡(调节摇瓶柜的温度和转速分别为 15℃,180rpm)提取

  1小时,得到含有恩拉霉素的提取液,然后将含有恩拉霉素的提取液在 1500r/min的转速下离心15min,收集含有恩拉霉素的上清液,将上清液在 30℃下减压浓缩至无液体,得到恩拉霉素粗提品。

  将大孔树脂按照常规处理方法进行预处理后,装入带有恒温保护套的玻璃柱子,用氯化钠浓度为 0.09mol/L及甲醇体积分数为 70%的甲醇水溶液以 60mL/h的速度泵入柱子来完成平衡。恩拉霉素的粗提品溶解在 10mL乙醇中,放在柱子的顶端,静止吸附 2小时,用0.5L的洗脱剂(甲醇/氯化钠浓度为0.09mol/L及甲醇体积分数为 70%的甲醇水溶液的体积比为 1:9)梯度洗脱,将洗脱液用旋转真空蒸发器减压浓缩蒸干,产率达到 60%。

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