恩拉霉素工艺与摇瓶柜

　将链霉菌 Streptomyces sp .NJwGY3665 菌种接到葡萄糖0.5%，牛肉膏 0.5 %,蛋白胨 0.5%，NaCl0.5%，琼脂

　　1.5%、水 96.5%，pH6.0的葡萄糖营养培养基中，进行斜面培养，在28℃下培养 2天。取斜面菌种，加入2～3ml无菌水（每18×180mm的试管斜面菌种），用接种环轻轻将菌苔洗下，制成孢子悬液，取 0.5ml孢子悬液接种到含 40ml葡萄糖 1.0%，玉米浆 3%，CaCO31%、酵母膏 0.5%、 NaCl0.1%、水 94.4%，pH7.0的液体种子培养基中培养 3天，培养温度为 28℃，转速为 200rpm。再将 5ml种子液接入到装液量为100ml含有葡萄糖 4.0%，淀粉 2.0%，玉米浆 2.0%、酵母膏 0.1%、黄豆饼粉 2%、NaCl0.5%、CaCO31.5%、 NH4Cl0.5%、磷酸二氢钾 0.2%、硫酸铵 0.3%、水 86.9%的发酵培养集中，在28℃，180rpm，pH6.0的条件下摇床发酵培养 5天，获得含有恩拉霉素的菌丝体，将 1g发酵后的菌丝体，用去离子水清洗，悬浮在 30mL乙醇中，乙醇的体积分数为 70%，pH为 4.5，用 KQ-100型超声机进行微生物细胞破碎 15min，得到含有恩拉霉素的混合物，将破碎后的混合物用 HYG-Ⅱa型摇瓶柜振荡（调节摇瓶柜的温度和转速分别为 15℃，180rpm）提取

　　1小时，得到含有恩拉霉素的提取液，然后将含有恩拉霉素的提取液在 1500r/min的转速下离心15min，收集含有恩拉霉素的上清液，将上清液在 30℃下减压浓缩至无液体，得到恩拉霉素粗提品。

　　将大孔树脂按照常规处理方法进行预处理后，装入带有恒温保护套的玻璃柱子，用氯化钠浓度为 0.09mol/L及甲醇体积分数为 70%的甲醇水溶液以 60mL/h的速度泵入柱子来完成平衡。恩拉霉素的粗提品溶解在 10mL乙醇中，放在柱子的顶端，静止吸附 2小时，用0.5L的洗脱剂（甲醇/氯化钠浓度为0.09mol/L及甲醇体积分数为 70%的甲醇水溶液的体积比为 1:9）梯度洗脱，将洗脱液用旋转真空蒸发器减压浓缩蒸干，产率达到 60%。

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