霉菌不是细菌,它要“氧气、潮湿、偏酸、25℃左右”才长得欢。霉菌生化培养箱若把温度、湿度、换气、光照其中任何一项调错,轻则孢子不萌,重则整个平板被杂菌抢占。下面介绍培养箱开机前各项参数的检查说明: 一、温度
霉菌最适生长温度24–28℃。箱内风机若直吹培养皿,皿盖会局部失水,琼脂出现“干裂环”。
检查:把0.1℃精度温度计放在搁板中央,关闭玻璃门10 min,读数漂移>0.5℃时,用锡箔纸折3 cm高挡风片,贴在风扇口,让气流改向侧壁循环即可。
二、湿度
多数培养箱自带超声波加湿器,设定88%RH即可。
检查:先跑空箱30 min,观察顶部是否挂水珠;如有,把湿度下调2%RH并在内壁贴一层0.5 mm吸水纸,水珠被纸毛细管吸走,避免滴落造成“卫星菌落”。
提示:箱内放水盘已过时,水面面积小,RH波动大;优先用外置加湿器+内循环风道。
三、换气
霉菌好氧,但箱内CO2>0.5%时菌丝变细、产孢延迟。
检查:确认箱体后下方有“自动换气”菜单,设定抽气时间。手动可拔硅胶塞,用计时器5 min后塞回,误差控制在10 s内,避免箱内温度下跌>1℃。
四、光照
曲霉、青霉的菌落颜色是鉴定依据,200 lx以上白光会诱导色素变异,黄曲霉由“黄”变“白”,给后续镜检挖坑。
检查:用黑胶布封住观察窗;若必须查看,开红色LED,霉菌对红光不敏感,可安全观察30 s。
五、防交叉
霉菌孢子<5µm,随气流飘。同一箱内若同时培养细菌,细菌平板边缘24 h就能长出真菌。
检查:
上层放霉菌,下层放细菌,气流方向自上而下,减少沉降污染。
所有平板倒置(盖在下),避免冷凝水落回菌面。
用3 M微孔封口膜沿皿盖缝贴一圈,既透气又挡孢子,开盖计数时撕掉即可。
六、快速验证
每次实验顺手倒3个PDA空白平板,一同进箱。若48 h后指示皿无菌,说明箱内洁净;若长杂菌,立即停箱,用75%酒精+紫外30 min联合灭菌,再重启实验。